青岛农业大学学报(自然科学版)

2017, v.34;No.126(03) 169-176

[打印本页] [关闭]
本期目录 | 过刊浏览 | 高级检索

禾谷镰刀菌14α-脱甲基酶的原核表达与纯化
Prokaryotic Expression and Purification of Sterol 14a-demethylase from Fusarium graminearum

钱恒伟;黄金光;

摘要(Abstract):

近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB)的主要药剂,主要作用于甾醇生物合成中的14α-脱甲基酶(CYP51),使真菌麦角甾醇的合成受阻,从而破坏细胞膜功能,起到杀菌的功能。本研究的目的是采用结构生物学的方法探究禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)中14α-脱甲基酶(FgCYP51B)的三维结构、生化功能以及其与三唑类杀菌剂的互作机制,进一步阐释禾谷镰刀菌对三唑类杀菌剂潜在的抗性风险。以禾谷镰刀菌(F.graminearum)的cDNA为模板,根据14α-脱甲基酶基因(FgCYP51B)序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了FgCYP51B基因并构建了3个全长表达载体pHAT2-CYP51B、pETM-20-CYP51B和pETM-30-CYP51B以及3个蛋白截短体表达载体pHAT2-CYP51B~(50-527),pETM-20-CYP51B~(50-527)和pETM-30-CYP51B~(50-527),将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3),并利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。结果表明:全长FgCYP51B蛋白在BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中均不表达;重组蛋白pHAT2-CYP51B~(50-527)在大肠杆菌中不表达,而重组蛋白pETM-20-CYP51B~(50-527)和pETM-30-CYP51B~(50-527)成功表达,并通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化。该蛋白的表达与纯化为其结构功能的研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 禾谷镰刀菌;;FgCYP51B;;原核表达;;蛋白纯化;;亲和层析;;离子交换;;分子筛

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然基金(31471735);; 国家重点研发计划重点专项黄淮海冬小麦化肥农药减施技术集成研究与示范(2017YFD0201705);; 青岛市现代农业产业技术体系(6622316106)

作者(Author): 钱恒伟;黄金光;

Email:

参考文献(References):

扩展功能
本文信息
服务与反馈
本文关键词相关文章
本文作者相关文章
中国知网
分享